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本试剂盒是利用RNase-Free DNase I结合优化的吸附柱上反应体系，可在总RNA抽提过程中将残留的基因组DNA轻松清除，无需再进行酚氯仿抽提，使操作更方便、安全，尽可能地避免RNA降解。纯化后的总RNA可以直接用于RNA印迹分析、斑点杂交、Poly(A)选择、体外翻译、RT-PCR分析、构建cDNA文库等RNA研究。

• RNA提取过程中提供柱上高效消化DNA的技术。
  
• 本试剂盒可与总RNA小量提取试剂盒(货号：GS2268)配合使用。
  
• 整个过程可在40min内完成。
  
• 可完全除去DNA污染。
  
• 得率高，重复性好。
  
• 无需苯酚/氯仿抽提或乙醇沉淀。

• 优化的Buffer RDD用于吸附柱中DNase的消化。这种缓冲液在溶液中也可高效地进行DNase消化。
  
• 提供的RNase-Free DNaseⅠ为液态形式。您可将其分装成单份，避免反复冻融。
  
• 使用前请按以下表格往DW当中加入无水乙醇，并在瓶身做好标记。
  

  	50T	100T
  DW Solution	36mL	72mL
  无水乙醇	4mL	8mL
  最终体积	40mL	80mL

• 操作RNA相关实验时要十分小心。从RNA样品的准备到后续的纯化和分析均应保持在RNase-free的环境中。使用RNase- free离心管、枪头、凝胶。始终佩戴手套

• 离心速度至少达到12000×g的小型离心机
  
• RNase-Free的移液枪和枪头
  
• RNase-Free离心管(1.5mL或2mL)
  
• 乙醇(96～100%)

• 准备DNaseⅠ工作溶液：
  加入10μL RNase-free水和40μL Buffer RDD到1.5mL RNase-free离心管中，混合均匀，然后加入30μL DNaseⅠ(30U)，将离心管颠倒温和混匀。离心管置于冰上，进行下一步骤。
  
  • 避免将工作液漩涡混匀。DNaseⅠ对物理变性非常敏感。
• 与总RNA小量提取试剂盒配合使用去除DNA。
  完成总RNA小量提取试剂盒说明书步骤4后，向吸附膜中央加入80μL DNaseⅠ工作液。25～37℃静置20～30min。
  
  • 最佳反应温度为25～37℃。
• 加入0.35mL DW Solution到吸附柱中，室温静置3min。
  
  • 这一步骤用于去除DNaseⅠ。
    
  • 检查DW Solution是否已加入乙醇。
• 室温12000×g离心1min，倒掉收集管中的液体
  
• 继续总RNA小量提取试剂盒说明书的步骤5-9。
  
  • 也可以与其他柱式总RNA抽提试剂盒配合使用。
• 提取的RNA可立即使用或-70℃长期保存。

• 前期处理后仍残留DNA污染
  
  • 消化基因组DNA时选择最佳反应温度(25～37℃)。
    
  • DNase溶液溶解后不要重新冷冻。
    
  • 工作液避免漩涡混匀。DNaseⅠ对物理变性非常敏感。
    
  • 减少原始材料使用量。
    
  • 您可尝试延长DNaseⅠ消化时间。
• RNA降解
  
  • 在RNase-free的环境分装DNaseⅠ。
    
  • 使用新鲜的样品。对于需要冻存的样品，确保样品采集后立即被放入液氮冷冻，并妥善保存于-70℃。
    
  • 我们推荐用液氮处理组织样品，并立即将样品裂解。
    
  • 所有操作步骤均戴手套。经常更换手套。
    
  • 推荐使用RNase-free的离心管。
• 后续酶促反应被抑制
  
  • 去除DNaseⅠ和洗涤步骤均应严格参照说明书操作。
    
  • 来源于DW或RPE Solution的残留乙醇可抑制下游酶促反应。吸附柱于12000×g离心2min去除残留的乙醇。